pcr技术在基因表达检测方法（pcr技术在基因表达检测方法中的应用）

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本文目录一览：

• 1、如何使用PCR技术获取目的基因
• 2、PCR,RT-PCR,实时荧光定量PCR的区别与联系
• 3、如何利用PCR技术鉴定转基因植物

如何使用PCR技术获取目的基因

PCR技术是扩增目的基因的方法。在这个过程中需要模板、原料、引物和酶等条件。

pcr技术大致有三步：第一步94°c使dna变性，双链变单链；第二步65°c退火；第三步72°c延伸 依次循环。taq DNA聚合酶是从极端微生物体内提取的，可以耐受高温，所以用它。

PCR是根据建基互补的原则来进行DNA扩增的。用PCR来获得目的基因，是依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物（即上游引物，下游引物）。

PCR技术是DNA扩增技术，它能在比较短的时间内产生大量的DNA。在获取目的基因后才使用PCR技术。获得目的基因的方法：构建基因文库 提取总DNA。

PCR,RT-PCR,实时荧光定量PCR的区别与联系

所说的PCR应该就是最常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增。

PCR：一种快速的DNA***方法，由变性--退火（复性）--延伸三个基本反应步骤构成。RT-PCR：反转录PCR（reverse transcription-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。

PCR是聚合酶链式反应，也就是体外特异性扩增DNA片段，是所有PCR技术的基础；RT-PCR有2种理解，即反转录RCR（reverse transcription PCR，以RNA为模板扩增DNA）或实时PCR（real time PCR），很显然，您指的是后者。

RT-PCR是real-time PCR的话，和qPCR是一样的，都是荧光定量PCR。相比普通PCR，会加入染料，便于收集荧光信号。结果可以得出相对/绝对 浓度等多组数据，然后根据你的目的，对实际数据进行分析。

PCR这里是指常规的PCR吧？就是以DNA为模板，dNTP为原料，在Taq DNA聚合酶的作用下，扩增DNA。RT-PCR即Reverse transcription-PCR，顾名思义就是讲mRNA通过反转录成第一链cDNA后，以第一链cDNA为模板进行PCR。

如何利用PCR技术鉴定转基因植物

利用PCR技术鉴定转基因植物的方法如下： 准备阶段：提取植物细胞的基因组DNA。 设计特异性引物和探针：针对转基因植物中插入的外源基因（如CaMV35s启动子和NOS终止子），设计特异性引物和探针。

建议对植物的组织液做个PCR，跑个胶看看，有条带说明基因肯定是导入了。

转基因作物检测大体分为两种：一是检测是否含有外源蛋白，即外源基因表达产物，主要***用酶联免疫吸附法和试纸条法；二是检测是否含有外源基因（DNA），主要有Southern杂交技术、基因芯片法和PCR检测法。

因此，必须***用一定的检测方法，才能筛选和鉴定出含有目的基因的重组体。目前已发展出一系列的转基因植物的筛选和鉴定方法。

、利用荧光PCR技术，设计出特异性引物与探针，优化实验参数，建立了一种灵敏、精确、定量和鉴定华番1号品种特异性的高效检测体系。

目前，分析转基因植物分子特征的常用方法包括Southern杂交、实时荧光定量PCR、数字PCR、基于PCR的染色体步移技术，以及 高通量测序技术 。其中，Southern杂交、实时荧光定量PCR和微滴数字PCR是分析外源基因拷贝数的常用方法。

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